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            禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸PCR試劑盒

            描述:禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準確性高,現貨供應,歡迎廣大新老客戶(hù)前來(lái)選購。

            更新時(shí)間:2024-03-06
            產(chǎn)品型號:50T
            廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
            詳情介紹

            【產(chǎn)品名稱(chēng)】禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸PCR試劑盒

            【包裝規格】 50T/盒

            【產(chǎn)品方法】雙重實(shí)時(shí)熒光PCR法

            【預期用途】

            適用于禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)檢測,可用于臨床禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)感染的輔助診斷,但不作確診使用。

            禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸PCR試劑盒【檢驗原理】

            本試劑盒采用TaqMan 探針?lè )▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設計一對禽liu感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)特異性引物,結合一條特異性探針,利用相應儀器對PCR 過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監測,實(shí)現檢測結果的定性分析,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

            【主要組成成份】

            反應液、酶液、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。

            【儲存條件及有效期】

            -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過(guò) 5 次,有效期 12 個(gè)月。

            【適用儀器】
            ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

            【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃,長(cháng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸, 嚴禁反復凍融。

            【使用方法】 

            1 樣品處理(樣本處理區)

            1.1樣本前處理 

            血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

            1.2 核酸提取

            推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

            2.試劑配制(試劑準備區) 

            根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照;反應管 數每滿(mǎn) 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

            試劑

            RP反應液

            酶液

            用量(樣本數為N)

            20μL

            1μL

            將混合好的測試反應液分裝到PCR 反應管中,21μL/管。

            3.加樣(樣本處理區) 

            將步驟1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。

            4.PCR 擴增(核酸擴增區)

            4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內;

            4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL; 熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

            4.3推薦循環(huán)參數設置:

            步驟

            循環(huán)數

            溫度

            時(shí)間

            收集熒光信號

            1

            1cycle

            42℃

            20min

            2

            1cycle

            95℃

            10min

            3

            40cycles

            94℃

            15sec


            55℃

            30sec

            5.結果分析判定

            5.1結果分析條件設定 

            設置Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析,當曲線(xiàn)出現整體傾斜時(shí),根據分析后圖像 調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照),重新分析結果。

            5.2結果判斷

            陽(yáng)性:檢測通道Ct 值≤35,且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn); 可疑:檢測通道 35值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35值≤38,且曲線(xiàn)有明顯的增長(cháng)曲線(xiàn), 判定為陽(yáng)性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

            6.質(zhì)控標準

             陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示; 陽(yáng)性質(zhì)控品:擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗視為無(wú)效。

            7.檢測方法的局限性 

            1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

            2. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì )出現假陽(yáng)性結果;

            3. 陽(yáng)性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會(huì )導致假陽(yáng)性結果;

            4. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì )導致假陰性結果;

            5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì )導致假陰性結果;

            6.試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果; 7.本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

            【注意事項】

            1.所有操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;

            2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完quan混勻并短暫離心;

            3.反應液應避光保存;

            4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

            5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專(zhuān)用工作服;

            6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進(jìn)行,以免交叉污染;

            7.實(shí)驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

            8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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